elisa檢測試劑盒常見問題以及解決方法!
1、如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?
建議血清應保存在-2o℃。若一次無法用完一瓶,無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。將血清從冷凍箱取出后,置于2~8℃冰箱使之緩慢融解,一般是融解過夜。
2、血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?
沉淀主要成分是纖維蛋白和脂蛋白,不會影響血清品質。 首先讓其沉淀在瓶子底部,中上層無沉淀血清直接轉出使用,下層血清裝到50ml無菌離心管,400g,離心3分鐘即可除去 (一般不建議采用過濾的方法除去沉 淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。
3、實驗室如何選擇適合的血清?
稀有的澳洲血清培養(yǎng)嬌貴細胞(小鼠es、原代細胞分離培養(yǎng)),南美血清或國產胎牛血清用于癌細胞、常規(guī)細胞系培養(yǎng)(用量大),新生牛血清用于病毒包裝(構建穩(wěn)轉細胞株)。
4、微生物培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
5、有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。 若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質量!
6、細胞培養(yǎng)中出現黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現有黑點生成,首先,要肉眼觀察微生物培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,微生物培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。 如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現可能與以下幾種情況有關
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
(2)血清質量不好,反復凍融的結果;
(3)配制培養(yǎng)基的ph值偏高,不宜細胞生長;
(4)培養(yǎng)原代細胞中出現小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
7、edta在細胞消化過程中起什么作用?
edta是一種螯合劑,它可以螯合ca2+ 或mg2+,而細胞表面很多和培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶結合的蛋白都是帶有ca2+ 或mg2+的,把這些離子螯合后,可以加速細胞和培養(yǎng)皿的脫離,促進消化。上皮類細胞的連接存在“橋粒”結構,是細胞間“牢固”的連接,但橋粒的形成依賴于鈣離子的存在。在胰酶消化細胞時,加入edta,可以破壞細胞的橋粒結構,使細胞能夠分散成單個細胞。通俗地說,就是破壞細胞間的粘連。
8、如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?
培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。選dmem做貼壁細胞培養(yǎng)、rpmi-1640做懸浮細胞培養(yǎng)。
9、 怎樣讓細胞適應新的條件?
從原條件逐漸過度:1/4、1/2、3/4,后是*新培養(yǎng)基。
10、為何微生物培養(yǎng)基保存于4℃,顏色會偏暗紅色?
(1).培養(yǎng)基內之co2會逐漸溢出,造成微生物培養(yǎng)基越來越偏堿性。顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。
(2).培養(yǎng)基偏堿之結果,將造成細胞生長停滯或死亡。需調整ph值至7.0~7.2. 11、細胞凍存管應如何解凍? 37℃,1~2分鐘內全部融解。 冷凍管建議放在液氮液面上面,由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全(戴護目鏡),預防冷凍管之爆裂。