擴(kuò)增曲線是描述pcr動(dòng)態(tài)進(jìn)程的曲線,以循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo),以反應(yīng)過程中實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)。
理論上pcr過程中反應(yīng)產(chǎn)物是以指數(shù)增長的,但隨著pcr循環(huán)數(shù)的增加,dna聚合酶失活、dntp和引物枯竭、反應(yīng)副產(chǎn)物阻礙反應(yīng)等原因,致使pcr的擴(kuò)增效率降低,產(chǎn)物生成的速度逐漸減緩,因此擴(kuò)增曲線是一條“s形”曲線。
擴(kuò)增曲線可以分成四個(gè)時(shí)期:基線期,指數(shù)期,線性期,平臺(tái)期。
基線期:擴(kuò)增曲線的水平部分,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物生成量的變化。
指數(shù)期:pcr指數(shù)擴(kuò)增期,擴(kuò)增曲線起峰,每個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物量與初始模板量符合指數(shù)關(guān)系,pcr產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系。
線性期:pcr反應(yīng)后期,由于pcr反應(yīng)體系各成分的消耗、產(chǎn)物抑制等因素的影響,反應(yīng)效率降低,產(chǎn)物量與初始模板量不再符合指數(shù)關(guān)系。
平臺(tái)期:pcr反應(yīng)停止,pcr產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)增加而增加。由于影響pcr擴(kuò)增的因素錯(cuò)綜復(fù)雜,每個(gè)反應(yīng)進(jìn)入平臺(tái)期的時(shí)間和平臺(tái)期的高低都各不相同。