求大批量提取dna的簡便方法，最近實(shí)驗(yàn)室要對轉(zhuǎn)基因的材料進(jìn)行pcr檢測，估計(jì)要提取數(shù)以千計(jì)的水稻葉片dna。實(shí)驗(yàn)室一直用ctab法。因?yàn)橹挥糜趐cr檢測，dna的量和質(zhì)量要求都不高，請問各位同學(xué)有沒有簡便快捷的提dna方法？
pcr的時(shí)候誤加了pbs有影響嗎？
提供一個(gè)方法，我最近一直用這個(gè)方法提取擬南芥dna用于pcr，效果很好，方便快捷。見文獻(xiàn)
a simple and rapid method for the preparation of plant genomic dna for pcr analysis
k.edwards, c.johnstone and c.thompson
nucleic acids research, vol. 19, no. 6 1349
實(shí)驗(yàn)室提擬南芥dna，edards溶液簡易法用機(jī)器震蕩完成，如果熟練加努力，一個(gè)人一天能提好幾百個(gè)。
液氮提取啊，收率很高的，而且方便
應(yīng)該是edwards,另外可以用葉片組織直接pcr的，可以自己摸索，也可以向公司購買。
我是小白來學(xué)習(xí)下~寫寫樓上的幫助
上面這位師兄的這篇文獻(xiàn)所敘述的方法被廣泛應(yīng)用中，實(shí)際操作過程中，個(gè)人不建議在提取液中加入ctab，那樣可能會導(dǎo)致dna擴(kuò)增不出來，具體什么原理，暫時(shí)也還么有搞懂，但實(shí)踐證明不加ctab，提取的水稻dna效果很好。并且耗時(shí)很短。幾千個(gè)的話，快的話幾天就搞定了。。
請問能說說你的詳細(xì)步驟嗎？是不是和文獻(xiàn)上的一樣：
用離心管切下葉片，然后用一次性的研磨棒磨碎，加入提取液，漩渦混勻5 s，室溫靜致1小時(shí)。13000 rpm離心1 min，取上清加入適量異丙醇沉淀核酸，13000 rpm離心5 min，干燥沉淀加水溶解。
這兩周我在做race，導(dǎo)師單人匹馬用傳統(tǒng)的ctab法把幾千個(gè)樣都搞掂了....不過再過幾個(gè)月又要檢測晚造的植株了，還是想要試一試簡便的方法。
你們導(dǎo)師是一位很強(qiáng)悍的人啊，這點(diǎn)上，讓人佩服，作為學(xué)生的我們實(shí)在是感到汗顏。
上面那位前輩的文獻(xiàn)我看了，其實(shí)有些步驟是不一樣的，比如說我們添加了一步酒精清洗dna，這樣的dna比不清洗的肯定要好。
但是師兄不知道你提這個(gè)dna干什么用的，有點(diǎn)必須說清楚，sds法提取的是微量dna，如果是做定位什么的，這個(gè)方法還是稍顯欠缺的。傳統(tǒng)ctab法自然是有它的道理。
那么下面就說說一般我們是怎么做的吧。
首先磨碎加入提取液混勻，我們甚至沒有用到漩渦震蕩儀，靜置一段時(shí)間，具體我還真沒怎么記是多久，反正一個(gè)小時(shí)以內(nèi)了，然后12000離心2min，吸取上清，加入異丙醇沉淀，靜置兩分鐘，適量混勻。12000離心5min，去除上清，加入75%酒精清洗，離心5min，去酒精，干燥沉淀，加入ddh2o溶解。
我就是核酸提取后，pcr多態(tài)性擴(kuò)增不出條帶（白板），是什么原因呢？用的引物是issr，材料是果樹類蓮霧葉片，體系沒有問題，是讓別人一塊的帶著混樣的，模板量是母液稀釋30倍后加2微升，提取步驟：ctab法，酚-氯仿-異戊醇抽提10min,氯仿-異戊醇抽提10min, 異丙醇沉淀，te溶解，rna酶處理，氯仿-異戊醇抽提10min, 異丙醇沉淀；dd水溶解===這種情況是年后才出現(xiàn)的，以前的時(shí)候沒有問題，已經(jīng)提取了好多次了，有的時(shí)候是剛提取后 就擴(kuò)增條帶很好，然后不到一周就又不行了，搞不明白啊~~
十分感謝。我們提dna只是為篩選轉(zhuǎn)基因的水稻植株，dna的質(zhì)量要求不高。
另再問，你是用液氮磨碎樣品的嗎？用的提取液應(yīng)該是和文獻(xiàn)的一樣的吧：200 mm tris hcl ph 7.5, 250 mm nacl, 25 mm edta, 0.5% sds。
同學(xué)你的dna質(zhì)量如何呢？譬如說擴(kuò)actin之類的正對照能擴(kuò)出來么？
正對照是怎么跑的呢？dna質(zhì)量個(gè)人認(rèn)為還行吧，方法是實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)方法，以前都沒問題，一直在找原因，頭都大了~·
師兄啊我倒是想幫你分析呀，但是我沒有實(shí)際用ctab操作過，都是理論上的知識，現(xiàn)在也就開始做實(shí)驗(yàn)頂天三個(gè)月，積淀還差的遠(yuǎn)，有心無力。
個(gè)人覺得吧實(shí)際做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候什么情況都能出現(xiàn)。還真說不出來個(gè)所以然。有幾次我更糾結(jié)呢，一個(gè)indel引物次p出來了，后面四次一次都沒有p出來。模板，引物，pcr條件都試過了，這個(gè)到現(xiàn)在都不知道什么原因。
你說有時(shí)候剛提取出來的擴(kuò)增條帶很好，不到一周就不行了，是不是dna被降解了？一般來說dan放在4度冰箱是可以保存兩個(gè)月的。一般溶解dna喜歡用tris ph 8.0 10mm。要不然師兄你試試吧。。。
水稻的話是要而且動作一定要快，液氮的，不然葉片咋個(gè)弄的碎喲，提取液用1.5%sds吧。感覺0.5%的話，稍微有點(diǎn)低。
請問一下師姐，要取多少的樣呢？可否用液氮磨碎后，再轉(zhuǎn)移到ep管，再加提取液？
首先答案是肯定的，這樣子弄可以的撒。
但是為什么要這樣做呢？
在液氮磨碎后轉(zhuǎn)移到ep管？你們用研缽磨碎的嗎？
還是說你們的樣本很難于磨碎，必須使用這樣的方式才能磨碎。
一般來說禾本科類的植物取樣本的量如水稻只需要3~5分之一葉片就足夠了，當(dāng)然這個(gè)也是要根據(jù)你做的實(shí)驗(yàn)的要求來的。
個(gè)人覺得如果做水稻這類禾本科植物的話不需要這么麻煩，這樣既浪費(fèi)液氮，樣本的取樣量要求也必較大，中間肯定有損失的撒。其他比如木本植物什么的話，可以試試
一般都是酚-氯仿抽提法
我提擬南芥用的！要求不高，pcr就好！
這個(gè)提出來，黑乎乎的一坨！明顯的不是dna?。。╡dtana2 代替了edta)
話說我也是做擬南芥的哇
用這個(gè)方法簡單方便，很快的
至于為什么會黑乎乎一坨我還真沒遇到過？關(guān)鍵是你還用的是坨？
難道不是液體？你提出來是固態(tài)？？？？？
不好意思上面這個(gè)說法有問題哈，按理來說溶解后的dna應(yīng)該是無色的吧？
用異丙醇沉淀后，去上清，就是黑乎乎的了！目測是蛋白，加70%乙醇洗2次~ddh2o溶不了！
這個(gè)要怎么說好呢
sds這個(gè)方法大家運(yùn)用的都已經(jīng)很熟悉了
禾本科類的植物用這個(gè)方法都很快捷簡單
現(xiàn)在來回答生理生態(tài)學(xué)的這位蟲友哈，因?yàn)闆]有名字只能這么稱呼了
至于我怎么提取的，具體方法請參照前面回帖，這里就不再說了
提取液的配方請參照前面的用量，次吸取的上清液應(yīng)該是無色或者綠色的。說是無色的是因?yàn)槿绻闳犹貏e微量（擬南芥播種后大約20天左右的苗去其葉片）的話，可能是看不到什么東西的，但dna是能提出來的。
如果這步么有問題，那么加入異丙醇沉淀，在管底可能會看到白色的沉淀物的。為啥我又要說可能呢？是因?yàn)閿M南芥這個(gè)東西基因組本來就小，樣本再一小，提取出來的量就可能肉眼不見咯。
如果是水稻的話，可以看到很明顯的白色沉淀哈~~
如果這樣子還在黑乎乎的話，就不知道怎么回事了。。。
只能說求人品。。。。
我們有植物直接pcr試劑盒，無需單獨(dú)提取dna,快速、靈敏、特異性強(qiáng)，適用于植物樣品的高通量篩選和檢測。qq：
請問你在析出dna那一步，加入-20度無水乙醇后放在-20度冰箱中多久啊。放久了會不會對dna有影響啊。
水稻直接丁丁點(diǎn)葉片，想辦法搗爛巴點(diǎn)，加naoh95度煮煮數(shù)分鐘，加點(diǎn)酸中和，上清液就可以去做pcr了