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      2. 雙酚A(BPA)ELISA試劑盒雙抗體夾心法

        發(fā)布時間:2024-08-25
        雙酚a(bpa)elisa試劑盒雙抗體夾心法:
        1.包被:用0.05mph9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
        2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
        3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
        4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的tmb底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
        5. 終止反應:于各反應孔中加入2m硫酸0.05ml。
        6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測od值:在elisa檢測儀上,于450nm(若以abts顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔od值,若大于規(guī)定的陰性對照od值的2.1倍,即為陽性。
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