溫和氣單胞菌pcr試劑盒pcr反應(yīng)條件設(shè)置：
a)預(yù)變性：95℃，5 min可以讓白細(xì)胞裂解，釋放可用于pcr擴(kuò)增的基因組dna。請(qǐng)勿縮短時(shí)間或降低溫度。
b)退火溫度：退火溫度設(shè)置為引物tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴(kuò)增，并提高全血模板的擴(kuò)增效率。因此，如擴(kuò)增產(chǎn)物特異性較差，可以建立一個(gè)溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板適退火溫度。
c)延伸時(shí)間：按30 sec/kb設(shè)定，如不足30 sec，設(shè)置30 sec即可。
d)擴(kuò)增循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)已可以擴(kuò)增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加。
3. 擴(kuò)增產(chǎn)物分析