一、相差顯微鏡直接調(diào)查法
活細(xì)胞對光線是通明的，光線通過活細(xì)胞時，波長和振幅幾乎沒有改動，所以用通常光鏡無法看清未經(jīng)染色的活細(xì)胞。為了調(diào)查活細(xì)胞的構(gòu)造，則需求通過其他路徑進(jìn)步構(gòu)造的反差。20世紀(jì)30年代，荷蘭物理學(xué)家zernike規(guī)劃的相差顯微鏡運用光的衍射和干與特性，把透過標(biāo)本不一樣區(qū)域的光波的光程轉(zhuǎn)成為振幅差，使細(xì)胞內(nèi)各種構(gòu)造之間呈明晰可見的明暗對比，然后成功地處理了生物學(xué)上的難題。
相差顯微鏡由相差聚光器和相差接物鏡兩個首要部分構(gòu)成。它與通常光鏡比較多了兩個部件，一個是在聚光器上添加一個環(huán)形光闌，使透光聚光器的光性構(gòu)成空心光錐、聚焦到標(biāo)本上。另一個是在物鏡的后焦面添加一個相板，相板有一個環(huán)形區(qū)，其巨細(xì)適好通過環(huán)形光闌的直射光，相板各區(qū)渡以不一樣物質(zhì)，使得通過環(huán)形區(qū)的光比通過相板其他部位的光超前或滯后1/4波長。相差顯微鏡的基本原理：把透過標(biāo)本的可見光的光程差成為振幅差，然后供給了各種構(gòu)造之間的對比度，使標(biāo)本的各種構(gòu)造變得更明晰可見。光性透過標(biāo)本后，發(fā)作折射，偏離了未通過標(biāo)本的的光性的光路，這兩租光性和軸后，則發(fā)作彼此干與現(xiàn)象。透過生物標(biāo)本發(fā)作折射的光性與未透過標(biāo)本的光性之間產(chǎn)生了光程差。前者被阻滯了1/4波長。如果把光程差再添加了1/4波長，則變?yōu)?/2波長，和軸后兩束光線的干與加強(qiáng)，使標(biāo)本周圍發(fā)作暈圈，進(jìn)步了可見度。
用相差顯微鏡可調(diào)查活細(xì)胞，并可在鏡下接連拍照記載體外培育細(xì)胞的活動，如細(xì)胞分裂、細(xì)胞搬遷運動等進(jìn)程。相差顯微鏡調(diào)查活細(xì)胞的進(jìn)程如下：
1、調(diào)整好相差顯微鏡
首要調(diào)好相位板使聚光器相位板號與接物鏡辦法倍數(shù)相一致。然后抽出接目鏡，再換輔佐鏡，移動輔佐鏡筒并調(diào)整聚光器相位板，使視影中兩個巨細(xì)一樣的光環(huán)彼此符合。再從頭換上原接目鏡，即成相差圖畫。當(dāng)替換不一樣倍數(shù)接物鏡時，需按上述進(jìn)程從頭調(diào)理。
2、調(diào)查培育瓶(皿)預(yù)備:準(zhǔn)白調(diào)查的培育瓶(皿)要平整，質(zhì)地均勻，透光性好，在調(diào)查前將培育瓶(皿)面擦凈，勿流任何殘留污跡。
3、調(diào)光:首要調(diào)整照明光的照明度和光軸，令視界照明均勻。首要用低倍鏡，并把照明燈虹彩光調(diào)至zui小，使光落于視界中心;如有偏斜可用聚光器的調(diào)整螺絲進(jìn)行調(diào)整。然后翻開虹彩光使視界內(nèi)呈均勻照明強(qiáng)度，并使目的物圖畫到達(dá)zui大極限反差停止。
4、調(diào)焦與拍攝:較的相差顯微鏡視界中心都有雙線十字，調(diào)焦前先轉(zhuǎn)動目鏡使十字的雙線明晰，然后再用調(diào)焦旋鈕調(diào)理物鏡，使調(diào)查物體明晰。在照相目鏡上也要采用相同進(jìn)程調(diào)焦。拍攝目鏡與調(diào)查目鏡焦點不一致時，也要根據(jù)需求調(diào)焦，通常照相時以拍攝目鏡為主，調(diào)查時以調(diào)查目鏡為主。照相時應(yīng)做好記載，把細(xì)胞品種、代數(shù)、調(diào)查內(nèi)容、擴(kuò)大倍數(shù)、時刻等逐個記載下來，以備日后查看和對比。
5、細(xì)胞調(diào)查:成長在瓶底上的細(xì)胞懸液zui合適用倒置顯微鏡相差顯微鏡調(diào)查，并且需附有長焦距聚光器，才干調(diào)查厚度較大的培育瓶(皿)。若用油鏡調(diào)查細(xì)胞微細(xì)構(gòu)造，需用支持物培育法，把細(xì)胞培育在長形蓋片上，調(diào)查時從瓶中取出制成暫時標(biāo)本。辦法為：取一大型載物片，再取一塊濾紙剪成長方窗形，置于載物片上，用吸管向紙框中滴數(shù)滴培育基，充溢框內(nèi)空間和浸濕紙框;把成長有細(xì)胞的蓋片含細(xì)胞面向上放在紙框中，再輔以大蓋片。調(diào)查時應(yīng)不斷從標(biāo)本旁邊面滴加加適量營養(yǎng)液，以防不斷蒸騰。此法只限于短時刻調(diào)查細(xì)胞之用。
二、暗視界顯微鏡調(diào)查活細(xì)胞
暗視界顯微鏡是運用特別的聚光器，是照明光線斜射不能進(jìn)入物鏡，所以視界是暗的，只要通過標(biāo)本散射的光線才干進(jìn)入物鏡被擴(kuò)大，在漆黑的布景中呈現(xiàn)亮堂的像。這種特別的照明辦法，使反差增大，分辯率進(jìn)步，乃至能夠調(diào)查到5nm的細(xì)小質(zhì)點。這種調(diào)查辦法首要用于調(diào)查物體的概括，分辯不清內(nèi)部的微細(xì)構(gòu)造，只合適調(diào)查活細(xì)胞的細(xì)胞核、線粒體，液體介質(zhì)中的細(xì)菌和霉菌等。所以這種辦法已較少運用。
三、縮時顯微鏡拍攝調(diào)查
這是跟著現(xiàn)代科技開展而呈現(xiàn)的一種新的調(diào)查辦法?？s時顯微鏡拍攝術(shù)可直接記載活細(xì)胞的接連動態(tài)改動進(jìn)程，能十分直觀地展示細(xì)胞成長進(jìn)程中的動態(tài)改動，如細(xì)胞運動、細(xì)胞分裂、細(xì)胞膜改動、細(xì)胞逝世等進(jìn)程。顯微鏡閉路電視體系或接上調(diào)查細(xì)胞改動的定格電視記載裝置，則更直接地調(diào)查到細(xì)胞的改動，但由于這套體系較貴重，所以運用尚不通常。
四、離體活細(xì)胞染色調(diào)查
1、中性紅染色
中性紅是常用的活體染色體染料，常用的濃度為1：10000，用生理鹽水(或hanks液)溶解后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌暗處存放，可直接浸染活細(xì)胞顯微鏡下調(diào)查或用于細(xì)胞的病毒蝕斑，肉眼核算空斑數(shù)目。因其毒性大，染色后細(xì)胞不能再培育。
2、結(jié)晶紫染色:運用濃度為0.1%，可用生理鹽水，室溫保留。蓋染料對死、活細(xì)胞均上色，故只能測出細(xì)胞總數(shù)。
3、臺盼藍(lán)染色:用0.5%濃度的臺盼藍(lán)，用pbs制造，室溫保留，蓋染料只對死細(xì)胞上色，可測定活細(xì)胞和核算存活百分率。
標(biāo)簽:細(xì)胞觀測三維細(xì)胞咖啡檢測光子計算避免電子天平干擾基因測序