原代細(xì)胞污染處理流程
1、將污染的培養(yǎng)液倒掉，轉(zhuǎn)燒瓶口，加入10 mlpbs，適當(dāng)晃動(dòng)清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。轉(zhuǎn)燒瓶口。
2、繼續(xù)加入10mlpbs，同樣方法晃動(dòng)，清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。
3、繼續(xù)加入5mlpbs，同樣方法洗瓶，主要是培養(yǎng)面，然后倒掉。
4、重復(fù)步驟3再洗。
5、重復(fù)步驟3再洗。
6、加入3-5ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。
7、原代細(xì)胞加入3ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。
8、再加入5mlpbs洗瓶，然后吸出。
9、加入10ml培養(yǎng)液，加入2ml雙抗，放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，5小時(shí)之后，倒掉培養(yǎng)基，加入pbs洗瓶?jī)纱?，然后加入胰酶消化，吹打后置于離心機(jī)800-1000r/min離心，然后洗一次。置于新的培養(yǎng)瓶里培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。
10、24h之后，視情況換液，若仍然污染嚴(yán)重，培養(yǎng)基渾濁，重復(fù)以上步驟，若看不到污染物，則繼續(xù)步驟1)、3）、4）、6）、8），然后加入培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。
11、24h之后，若仍污染嚴(yán)重，可再重復(fù)一次，若還污染只能棄之（不過一般沒有出現(xiàn)這種情況），若鏡下不見污染物，則換液pbs洗瓶，原代細(xì)胞正常培養(yǎng)。