中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
sn／t 0915—2000
進出口茶葉咖啡堿測定方法
method for the determination of caffeine in tea for import and export
2000—06—22發(fā)布
2000—11—01實施
中華人民共和國國家出入境檢驗檢疫局 發(fā)布
前 言
本標(biāo)準(zhǔn)是對原專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)zb x50 010—1986《出口茶葉咖啡堿測定方法》的修訂。
本標(biāo)準(zhǔn)與前版無技術(shù)路線的改變，僅在標(biāo)準(zhǔn)格式上按照gb／t 1.1—1993《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1單元：標(biāo)準(zhǔn)的起草與表述規(guī)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)編寫的基本規(guī)定》的要求進行修訂。
本標(biāo)準(zhǔn)從實施之日起，同時代替zb x50 010—1986。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國國家出入境檢驗檢疫局提出并歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局負(fù)責(zé)起草。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：汪玲平、畢立新。
中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
進出口茶葉咖啡堿測定方法
method for the determination of caffeine in tea for import and export
sn／t 0915—2000
代替zb xs0 010—1986
1、范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進出口茶葉咖啡堿測定的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于進出口茶葉咖啡堿的測定。
2、引用標(biāo)準(zhǔn)
下列標(biāo)準(zhǔn)所包含的條文，通過在本標(biāo)準(zhǔn)中引用而構(gòu)成為本標(biāo)準(zhǔn)的條文。本標(biāo)準(zhǔn)出版時，所示版本均為有效。所有標(biāo)準(zhǔn)都會被修訂，使用本標(biāo)準(zhǔn)的各方應(yīng)探討使用下列標(biāo)準(zhǔn)最新版本的可能性。
sn／t 0918—2000進出口茶葉抽樣方法
3、抽樣
按sn／t 0918抽取試樣。
4、檢驗方法
4.1 原理
將茶葉與沸蒸餾水和氧化鎂共熱，游離出咖啡堿，經(jīng)酸化后，用三氯甲烷抽提，抽提液濃縮后，以凱氏定氮法測得其含氮量，換算為咖啡堿含量。
4.2 試劑
4.2.1 重質(zhì)氧化鎂：含量在98％以上，氧化鎂經(jīng)900℃灼燒30 min，即成重質(zhì)氧化鎂。
4.2.2 三氯甲烷：分析純。
4.2.3 硫酸：分析純，密度1.84 kg／l，不含亞硝酸等含氮物。
4.2.4 氫氧化鉀和氫氧化鈉：分析純。
4.2.5 硫酸銅和無水硫酸鉀：分析純，不含銨鹽。
4.2.6 甲基紅次甲基藍混合指示劑
取0.1 g甲基紅及0.01 g次甲基藍，溶解于100 ml的48％乙醇內(nèi)，振蕩數(shù)次，靜置(12～15)h后，過濾，取濾液備用。
4.2.7 o.1 ％甲基橙指示劑。
4.2.8 1％酚酞指示劑。
4.2.9 0.1 mol／l。氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液
取氫氧化鈉4.5 g，溶于1l剛煮沸冷卻后的蒸餾水中。用下法標(biāo)定其濃度：
精確稱取鄰苯二甲酸氫鉀(基準(zhǔn)試劑)o.7 g置于300 ml。錐形瓶中，加蒸餾水50 ml，溶解后，煮沸數(shù)分鐘。冷后加入酚酞指示劑3滴，隨即用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至呈粉紅色為止。按式(1)計算：
4.2.10 0.1 mol／l硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
用蒸餾水稀釋2.7 ml硫酸至1 l，混合均勻，其濃度以甲基橙為指示劑，用上述氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定。
4.2.11 40％氫氧化鈉溶液
取200 g不含硝酸鹽的工業(yè)用氫氧化鈉，溶于蒸餾水，稀釋至500 ml。
4.2.12 1％氫氧化鉀溶液。
4.3 儀器
4.3.1 分析天平：感量o.000 1 g。
4.3.2 錐形瓶：1 000 ml，500 ml，300 ml。
4.3.3 分液漏斗：500 ml，125 ml。
4.3.4 凱氏燒瓶：500 ml。
4.3.5 凱氏定氮裝置。
4.3.6 標(biāo)準(zhǔn)篩：630 μm。
4.4 分析步驟
稱取磨碎、通過630 μm篩的5 g茶樣(精確至0.000 2 g)，置于已知質(zhì)量的1 l錐形瓶中，加入蒸餾水約500 ml，旋轉(zhuǎn)搖勻，加熱至沸騰。加入10 g重質(zhì)氧化鎂，在小火上輕微煮沸，時時搖動，并加入少量蒸餾水，以阻止泡沫發(fā)生和將粘附在瓶上茶葉沖洗下去。經(jīng)2 h，?；鹄鋮s，加蒸餾水至液體和樣品總質(zhì)量達510 g，過濾，收集澄清的濾液200 ml(相當(dāng)于樣品質(zhì)量的40％)于500 ml分液漏斗中，加入20 ml硫酸(1+9)溶液，用三氯甲烷抽取6次，用量依次為25、20、15、10、10、10 ml，合并抽提液于125 ml分液漏斗中，加入5 ml l％氫氧化鉀溶液，振搖，靜置，分層后排盡三氯甲烷層至凱氏燒瓶中，用每份10 ml三氯甲烷的洗滌分液漏斗中的堿液2次，合并三氯甲烷洗液于上述凱氏燒瓶中，蒸發(fā)或蒸餾至三氯甲烷的體積小于25 ml。依次加入10 g無水硫酸鉀、o.5 g硫酸銅和25 ml硫酸，先在酸的沸點下加熱，然后逐漸提高溫度至泡沫消失，并繼續(xù)煮解，至溶液變?yōu)榈该?，再煮?.5 h。放冷，加200 ml。蒸餾水，混勻。加入鋅?；蚋∈瘮?shù)粒，再沿瓶壁徐徐加入40 ％氫氧化鈉溶液，使溶液呈強堿性，迅即用安全球緊密連接定氮瓶和冷凝器。冷凝器的出口應(yīng)預(yù)先接好球管。直伸至500 ml錐形瓶中50 ml o.1 mol／l硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和2～3滴甲基紅次甲基藍混合指示劑的液面以下。將定氮瓶中內(nèi)容物搖勻后，加熱蒸餾至其中液體減少至約150 ml時，斷開定氮瓶與安全球，停止蒸餾。用蒸餾水洗滌安全球及冷凝器，收集洗液于受器內(nèi)，然后，以0.1 mol／l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定受器中剩余的酸，直至呈淺綠色為止，記下讀數(shù)。
另在同樣條件下做試劑的空白試驗。
4.5 結(jié)果計算
茶中咖啡堿的于態(tài)百分率(x)按式(2)計算：
4.6 允許誤差
測定應(yīng)作雙試驗。由同一分析者、同時或相繼進行的二次測定結(jié)果之差，不得超過0.2％。