cellsorter高速自動(dòng)細(xì)胞分選
-挑選細(xì)胞后的成活率
分選后，將熒光細(xì)胞注入并在新的培養(yǎng)皿中進(jìn)一步培養(yǎng)。ne-4c和3t3細(xì)胞在新培養(yǎng)皿中顯然具有活力并增殖，從而導(dǎo)致無標(biāo)記細(xì)胞的熒光細(xì)胞單培養(yǎng)。由于基于細(xì)胞形態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞的生存能力并不直接，因此我們完成了mtt測試。根據(jù)分類后的還原能力，大多數(shù)小膠質(zhì)細(xì)胞是可行的。
為了量化該技術(shù)的分類效率和細(xì)胞存活率，我們使用了未標(biāo)記的3t3和ne-4c細(xì)胞。在初步實(shí)驗(yàn)中，我們在自動(dòng)檢測細(xì)胞后，用孔徑為62 mm的微型移液器吸取了數(shù)百個(gè)3t3細(xì)胞，真空度為12,000 pa。我們發(fā)現(xiàn)增加的真空度不會(huì)改變細(xì)胞存活率。我們還進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，以調(diào)查從cd1小鼠制備的原代神經(jīng)膠質(zhì)培養(yǎng)物的存活率。用*-edta對細(xì)胞進(jìn)行3分鐘的預(yù)處理，在選擇分選并提取細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中，其存活率為100％。
為了比較分選后的細(xì)胞與未分選但通過pdms表面經(jīng)過新培養(yǎng)皿的細(xì)胞的存活力，采用*-edta的常規(guī)方法，我們測量了正常傳代后的存活率，如``細(xì)胞存活率測定''一節(jié)中所述'。
短暫（30-60 s）*-edta處理后，我們在顯微鏡的相差模式下捕獲的培養(yǎng)圖像中手動(dòng)標(biāo)記了3-5個(gè)細(xì)胞。我們調(diào)整了連接到微量移液器的注射器的真空度，該注射器的孔徑為69 mm，并自動(dòng)拾取細(xì)胞。0真空表示注射器中的環(huán)境壓力。然后將細(xì)胞注射到置于新皮氏培養(yǎng)皿中間的克隆圓筒中，以簡化隨后的細(xì)胞搜索。2小時(shí)后，我們在新培養(yǎng)皿中計(jì)數(shù)了活細(xì)胞。拾取效率計(jì)算為拾取的選定單元格數(shù)與所有選定單元格數(shù)之比。平均拾取效率為93 63t3和ne-4c分別為4％和100％。在一些實(shí)驗(yàn)中，微量移液器從選擇進(jìn)行分選的細(xì)胞附近收集了額外的細(xì)胞。這些單元的數(shù)量在“拾取的單元數(shù)”列中的1信號之后顯示。未選擇進(jìn)行排序的單元格的拾取率是該數(shù)量與所有選定單元格數(shù)量的比率。3t3和ne-4c 的未選擇細(xì)胞的平均拾取率分別為11 6 12％和6 6 6％。將存活率計(jì)算為存活的細(xì)胞數(shù)與拾取的細(xì)胞數(shù)之比，包括未選擇的細(xì)胞。平均生存率為66 6 12％和88 63t3和ne-4c分別為16％。將平均比率計(jì)算為樣本平均數(shù)加權(quán)的每個(gè)比率的分母，即輸入單元格的數(shù)量。通過加權(quán)樣本方差除以實(shí)驗(yàn)次數(shù)的平方根來近似均值誤差