小麥源性成分探針?lè)晒舛縫cr試劑盒原理簡(jiǎn)述:
1. taqman熒光探針:pcr擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;pcr擴(kuò)增時(shí),taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條dna鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與pcr產(chǎn)物形成*同步。而新型taqman-mgb探針使該技術(shù)既可進(jìn)行基因定量分析,又可分析基因突變(snp),有望成為基因診斷和個(gè)體化用藥分析的*技術(shù)平臺(tái)。
2. sybr熒光染料:在pcr反應(yīng)體系中,加入過(guò)量sybr熒光染料,sybr熒光染料非特異性地?fù)饺雂na雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的sybr染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與pcr產(chǎn)物的增加*同步。sybr僅與雙鏈dna進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過(guò)溶解曲線,確定pcr反應(yīng)是否特異。
3. 分子信標(biāo):是一種在5和3末端自身形成一個(gè)8個(gè)堿基左右的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針,兩端的核酸序列互補(bǔ)配對(duì),導(dǎo)致熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)緊緊靠近,不會(huì)產(chǎn)生熒光。pcr產(chǎn)物生成后,退火過(guò)程中,分子信標(biāo)中間部分與特定dna序列配對(duì),熒光基因與淬滅基因分離產(chǎn)生熒光 。
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