堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,堿處理法中常用的處理劑為石灰、氫氧化、鈉、碳酸鈉等,用氫氧化鈉浸提時效果較好。一般的是把樣品勻漿后,用堿溶液多次溶脹后,再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性,如膠原肽鍵水解,含羥基、疏 基的氨基酸全部被破壞;所得產(chǎn)物等電點ph值較低,天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷?,得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問題,若比 較嚴重的話,還會產(chǎn)生 d、l-型氨基酸消旋混合物,若d型氨基酸含量高過l 型氨基酸,則會抑制l-型氨基酸的吸收,有些d型氨基酸有毒,甚至有致癌、致畸和致突變的作用。而且堿法提取的含量較低,用氫氧化鈉從魷魚皮中提取堿溶性 膠原蛋白,其得率只有3%(以濕基計)。所以,若想提取結(jié)構(gòu)完整、使用安全的膠原蛋白,很少采用此方法。有關(guān)單獨采用堿法提取膠原蛋白的報道不多,一般是 堿法提取和酸法提法結(jié)合使用。比如在4℃條件下,魚骨用0.1mol/l的naoh浸泡6h,再用2.5%nacl浸泡6h去除雜蛋白,用10%的異丙醇 溶液去除脂肪,0.1mol/l的檸檬酸浸泡3d,后得到無色無味的膠原蛋白,提取率為11.87%。注意,無論酸法或堿法,均可有效地提取膠原蛋白,有人分別采用醋酸- 鹽酸的混合酸液(ph3.0)和naoh溶液(ph12.0)提取骨膠原蛋白,提取率基本相當。但是,這兩種方法提取膠原蛋白不僅容易影響膠原蛋白的生物 活性,而且提取后產(chǎn)生的酸性或堿性廢液必須進行適當處理,以避免對環(huán)境造成污染。