中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)
sn/t 0337-2019
代替sn/t 0037-1995
出口植物源性食品中克百威及其代謝物殘留量的測(cè)定
液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照gb/t 1.1-2009給出的規(guī)則起草。
本標(biāo)準(zhǔn)代替sn 0337-95《出口水果和蔬菜中克百威殘留量檢驗(yàn)方法》。
本標(biāo)準(zhǔn)與sn 0337-95相比，主要技術(shù)性變化如下：
——標(biāo)準(zhǔn)名稱由《出口水果和蔬菜中克百威殘留量檢驗(yàn)方法》修改為《出口植物源性食品中克百威及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》；
——增加了克百威代謝物3-羥基克百威的檢測(cè)；
——擴(kuò)大了標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的適用范圍；
——刪減了抽樣部分；
——改進(jìn)了樣品前處理技術(shù)；
——儀器方法由氣相色譜法變更為液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法。
——降低了定量限，針對(duì)不同樣品基質(zhì)給出了克百威及其代謝物的添加回收率范圍。
請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專li。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專li的責(zé)任。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)海關(guān)總署提出并歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李曉娟、吳玉平、張洋、施鵬斐、王超、李淑娟。
本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：
——sn 0337-1995。
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了出口植物源性食品中克百威及其代謝物3-羥基克百威殘留量的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于大米、小麥、大豆、花生、洋蔥、油菜、菠菜、番茄、黃瓜、馬鈴薯、橙子、蘋(píng)果、香蕉和茶葉中克百威及其代謝物3-羥基克百威殘留量的檢測(cè)和確證。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不ke少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
gb/t 2763-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留量
gb/t 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法
3 原理
試樣加酸化乙腈振蕩提取，經(jīng)quechers方法對(duì)提取液進(jìn)行凈化，采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法測(cè)定，外標(biāo)法定量。
4 試劑和材料
除非另有說(shuō)明，所有試劑均為分析純，水為gb/t 6682規(guī)定的一級(jí)水。
4.1 乙腈:色譜純。
4.2 甲酸：色譜純。
4.3 乙酸。
4.4 氯化鈉。
4.5 無(wú)水硫酸鎂。
4.6 乙二胺-n-丙基硅烷化硅膠（psa）：40μm～60μm。
4.7 十八烷基硅烷鍵合硅膠（c18）：40μm～60μm。
4.8 石墨化炭黑（gcb）：40μm～120μm。
4.9 0.5%乙酸-乙腈溶液：準(zhǔn)確量取2.5 ml乙酸于500 ml容量瓶中，加入乙腈（4.1）定容，混勻。
4.10 0.5%甲酸溶液：準(zhǔn)確量取2.5 ml甲酸于500 ml容量瓶中，加入一級(jí)水定容，混勻。
4.11 0.1%甲酸溶液：準(zhǔn)確量取0.5 ml甲酸于500 ml容量瓶中，加入一級(jí)水定容，混勻。
4.12 乙腈-水溶液（30+70,體積比）：取30 ml乙腈（4.1）和70 ml一級(jí)水混合均勻。
4.13 0.1%甲酸-乙腈溶液：準(zhǔn)確量取0.5 ml甲酸于500 ml容量瓶中，加入乙腈（4.2）定容，混勻。
4.14 克百威標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：c12h15no3，cas號(hào)：1563-66-2，純度大于等于90%。
4.15 3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)品：c12h15no4，cas號(hào)：16655-82-6，純度大于等于90%。
4.16 克百威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取10 mg（精確至0.1mg)克百威標(biāo)準(zhǔn)品于10 ml容量瓶中，用乙腈（4.2）溶解并定容，配制成濃度約為1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0℃～4℃冰箱內(nèi)避光保存。
4.17 3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取10 mg（精確至0.1mg)克百威標(biāo)準(zhǔn)品于10 ml容量瓶中，用乙腈（4.1）溶解并定容，配制成濃度約為1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0℃～4℃冰箱內(nèi)避光保存。
4.18 克百威標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取適當(dāng)體積的克百威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈（4.1）配制成濃度為10.0mg/l的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于0℃～4℃冰箱內(nèi)避光保存。
4.19 3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確吸取適當(dāng)體積的3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用乙腈（4.1）配制成濃度為10.0 mg/l的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于0℃～4℃冰箱內(nèi)避光保存。
4.20 克百威和3-羥基克百威混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量的克百威標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.18）和3-羥基克百威（4.19）標(biāo)準(zhǔn)中間液，用乙腈-水溶液（4.12）配制成標(biāo)準(zhǔn)工作液，該工作液需現(xiàn)用現(xiàn)配。
5 儀器設(shè)備
5.1 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（esi）。
5.2 電子天平：感量0.01 mg和0.01 g。
5.3 振蕩器。
5.4 旋渦混合器。
5.5 離心機(jī)：最高轉(zhuǎn)速不低于10 000 r/min。
5.6 氮吹濃縮儀。
5.7 高速離心管：規(guī)格為50 ml和5 ml。
6 試樣制備與保存
6.1 試樣制備
糧谷、油料及茶葉類樣品：取代表性樣品約500 g ,用粉碎機(jī)全部粉碎并通過(guò)20目篩；水果及蔬菜類樣品：取代表性樣品約500 g，用勻漿機(jī)或組織搗碎機(jī)均質(zhì)。樣品制備后分別裝入潔凈的盛樣瓶?jī)?nèi)，密封并標(biāo)明標(biāo)記。
6.2 試樣保存
糧谷、油料及茶葉類試樣于0℃～4℃保存；水果及蔬菜類試樣于-18℃以下冷凍保存。在抽樣及制樣的過(guò)程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。
7 測(cè)定步驟
7.1 提取
7.1.1 蔬菜和水果類：稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 ml離心管中，加入10 ml 0.5%乙酸-乙腈溶液（4.9），渦旋混勻后振蕩提取30 min，加入約2 g氯化鈉和約2 g無(wú)水硫酸鎂，渦旋混勻，20 000 r/min條件下離心3 min，取上清液待凈化。
7.1.2 糧谷、油料類和茶葉類：稱取2 g試樣（精確至0.01 g）于50 ml離心管中，加入5 ml0.5%乙酸溶液（4.10），渦旋混勻靜置30min，加入10 ml 0.5%乙酸-乙腈溶液（4.9），渦旋混勻后振蕩提取30 min，加入約2 g氯化鈉和約2 g無(wú)水硫酸鎂，渦旋混勻，于10 000 r/min條件下離心3 min，取上清液待凈化。
7.2 凈化
準(zhǔn)確稱取250 mg無(wú)水硫酸鎂、100 mg psa、100 mg c18和50 mg gcb凈化材料加入5 ml高速離心管中。準(zhǔn)確移取2ml上清液（7.1）加入5ml高速離心管中，渦旋混勻，于10000r/min離心3 min，取1 ml上清液置于玻璃管中，于40℃下氮?dú)獯抵两?，再加?.0 ml乙腈-水溶液（4.12）充分溶解定容，過(guò)0.2μm尼龍濾膜，待lc-ms/ms測(cè)定。
7.3 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定
7.3.1 液相色譜條件
7.3.1.1 色譜柱：c18，100mm×2.1 mm×1.7μm，或性能相當(dāng)者。
7.3.1.2 柱溫：45℃。
7.3.1.3 進(jìn)樣量：5μl。
7.3.1.4 流動(dòng)相及梯度洗脫條件見(jiàn)表1。
7.3.2 質(zhì)譜條件
儀器質(zhì)譜條件參見(jiàn)附錄a。
7.3.3 定性測(cè)定
按照7.3.1的條件測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣液，如果樣液與標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間相差不超過(guò)±2.5%，在扣除背景后的質(zhì)譜圖中，所選擇的監(jiān)測(cè)離子全部出現(xiàn)，且定性離子的相對(duì)豐度（用相對(duì)于zui強(qiáng)離子豐度的強(qiáng)度百分比表示）與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度允許偏差不超過(guò)表2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。
7.3.4 定量測(cè)定
在7.3.1儀器最佳工作狀態(tài)下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)樣，以待測(cè)物色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)；如果超出線性范圍，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)稀釋后進(jìn)樣測(cè)定。在上述色譜條件下，克百威和3-羥基克百威的保留時(shí)間分別約為2.2 min和1.9 min，克百威和3-羥基克百威標(biāo)準(zhǔn)品的選擇離子色譜圖參見(jiàn)附錄b中的圖b.1和圖b.2。
7.4 空白試驗(yàn)
除不加試樣外，均按上述7.1～7.3步驟進(jìn)行。
8 結(jié)果計(jì)算和表述
液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量，按式（1）分別計(jì)算試樣中克百威和3-羥基克百威的殘留量：
式中：
x——試樣中克百威和3-羥基克百威殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
c——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的試樣溶液中被測(cè)組分的濃度，單位為微克每毫升（μg/ml）；
f——稀釋倍數(shù)；
v——樣液最終定容體積，單位為毫升（ml）；
m——試樣的質(zhì)量，單位為為克(g)。
計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。
克百威在gb 2763-2016中定義的殘留物為克百威及3-羥基克百威之和，以克百威表示。因此按式（2）計(jì)算試樣中克百威的總殘留量：
式中：
x總——試樣中以克百威表示的總殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
x克百威——試樣中克百威的殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
x3-羥基克百威——試樣中3-羥基克百威的殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
0.93——3-羥基克百威換算為克百威的系數(shù)。
9 定量限與回收率
9.1 定量限
液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜檢測(cè)方法對(duì)大米、小麥、大豆、花生、洋蔥、油菜、菠菜、番茄、黃瓜、馬鈴薯、橙子、蘋(píng)果、香蕉和茶葉中克百威和3-羥基克百威的定量限均為0.005 mg/kg。
9.2 添加濃度和回收率
回收率數(shù)據(jù)參見(jiàn)附錄c。