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      2. 研究揭示miR-133a的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及其在細胞分化中的作用

        發(fā)布時間:2024-09-02
        9月9日,學術期刊cell death & disease發(fā)表了*生物物理研究所衛(wèi)濤濤課題組與美國creighton大學屠亞平課題組的合作論文,這是衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組*合作所取得的又一成果。研究人員發(fā)現(xiàn),mir-133a表達的上調(diào)促進了線粒體生物發(fā)生和肌細胞分化,并進一步通過“定向染色質(zhì)構象捕獲”(capture)技術找到了調(diào)控mir-133a表達的上游調(diào)控因子kap1,從而加深了對mir-133a轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及重要功能的了解。
        microrna(mirna)在多種生理及病理生理過程中起著重要的調(diào)控作用。在前期工作中,衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組密切合作,通過分子、細胞及動物實驗證明,tgf-β1誘導表達的mir-133a可通過負反饋調(diào)節(jié)的方式作用于tgf-β1受體及其效應分子,負調(diào)控tgf-β1信號通路,從而抑制甚至部分逆轉(zhuǎn)特發(fā)性肺纖維化(ipf)的進程,相關論文于2019年9月11日發(fā)表于cell death & disease雜志。
        鑒于mir-133a的重要生理及病理生理學作用,探明其調(diào)控機制將對治療肺纖維化等相關疾病提供重要的線索。衛(wèi)濤濤課題組與屠亞平課題組進一步以成肌細胞分化過程中mir-133a動態(tài)表達為模型,使用基于crispr/cas9的capture技術,結(jié)合高通量測序及生物信息學分析,系統(tǒng)研究了mir-133a表達的調(diào)控機制,發(fā)現(xiàn)kap1相關的轉(zhuǎn)錄調(diào)控復合物可抑制c2c12成肌細胞中mir-133a的表達;敲低kap1可增加mir-133a的表達,此過程伴隨線粒體生物發(fā)生和c2c12成肌細胞分化;mir-133a的上調(diào)足以誘導線粒體生物發(fā)生和c2c12成肌細胞分化,而mir-133a抑制劑則顯著抑制細胞分化。
        該研究*使用capture技術鑒定了細胞分化過程中調(diào)控mir-133a表達的重要因子,為理解microrna的調(diào)控機制提供了新思路。
        采用ausbian進口特級胎牛血清,透析過濾去除10000d以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對細胞產(chǎn)生干擾。適合脈沖示蹤實驗(例如同位素標記特定小分子,并加入到培養(yǎng)體系中,以研究細胞代謝),也適合轉(zhuǎn)染cho后的篩選等應用。
        儲存條件
        -20°c凍存。
        胎牛血清*解凍后,應按單次習慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°c凍存。
        若置于4°c的血清,應在一周內(nèi)用完。
        為保證細胞培養(yǎng)的效果,血清和培養(yǎng)基的配置,應遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液,應于一周內(nèi)用完。
        血清避免反復凍融,避免在4°c或更高溫度儲存過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。
        血清融化 專業(yè)方法:
        目的;更好保留血清中活性成分,使細胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。
        *血清廠家 專業(yè)融化方法(此方法通用,適用于所有種類的血清):
        注意:
        ♦ 在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身,使血清混勻,但搖動中盡量不要產(chǎn)生泡沫!
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