本生帶您了解—常見的酶標(biāo)板的分類
酶標(biāo)板在酶聯(lián)免疫吸附試驗中, 參與免疫學(xué)反應(yīng)的抗原、抗體、標(biāo)記抗體或抗原的純度、濃度和比例;緩沖液種類、濃度和離子強度、ph值和反應(yīng)溫度、時間等條件起著關(guān)鍵作用。
此外,作為載體的固相聚苯乙烯(polystyrene)表面對抗原、抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附也起著重要作用。
根據(jù)酶標(biāo)板與蛋白和其它分子結(jié)合能力的不同可以將酶標(biāo)板分為以下幾類：
1、高結(jié)合力酶標(biāo)板：
酶標(biāo)板經(jīng)表面處理后蛋白結(jié)合能力大大增強，可達300~400ng igg/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kd。使用該類酶標(biāo)板可提高敏感性，并可相對減少包被蛋白的濃度和用量，不足之處為較易產(chǎn)生非特異性反應(yīng)?？乖蚩贵w包被后，以非離子去污劑無法有效地封閉未結(jié)合蛋白的部位，需使用蛋白作為封閉劑。
2、中結(jié)合力酶標(biāo)板：
酶標(biāo)板經(jīng)表面疏水鍵被動與蛋白結(jié)合，適合作為分子量>20kd的大分子蛋白的固相載體，其蛋白結(jié)合能力為200~300ng igg/cm2。
由于該類酶標(biāo)板所具有的僅與大分子結(jié)合的特性，適用于作為未純化抗體或抗原的固相載體，可降低潛在的非特異性叉反應(yīng)。該類板可以惰性蛋白或非離子去污劑作為封閉液。
3、氨基化酶標(biāo)板：
酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體。使用合適的緩沖液和ph值，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。
由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力，可用于固定溶于triton-100、tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性，一部分蛋白分子無法結(jié)合;
此外，其表面需有效地封閉。由于親水和共價的表面特性，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團發(fā)生作用。
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