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      2. L-02人正常肝細(xì)胞傳代、復(fù)蘇技巧

        發(fā)布時(shí)間:2024-08-24
        l-02人正常肝細(xì)胞
        human normal liver cells ,l02 hl-7702 l0-2 lo2
        貨號(hào):yj-h054(str鑒定)
        價(jià)格: 1800.0
        規(guī)格: 1*106
        細(xì)胞描述
        l-02細(xì)胞建系鑒定于1980年(葉秀珍等,1980)。該細(xì)胞是一株正常肝細(xì)胞系,具有典型的肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征,可用于多種實(shí)驗(yàn)研究。該株細(xì)胞dna分型在細(xì)胞系檢索中找到基本匹配的細(xì)胞系,dsmz數(shù)據(jù)庫(kù)顯示細(xì)胞名為l-02,細(xì)胞號(hào)對(duì)應(yīng)cvcl_6926。problematic cell line: contaminated. shown to be a hela derivative (pubmed=26116706). originally thought to originate from a normal fetal liver.細(xì)胞str位點(diǎn)信息:d5s818:11,12;d13s317:13.3,13.3;d7s820:12,12;d16s539:9,10;vwa :16,16;th01:7,7;amel:x,x; tpox :12,12; csf1po :10,10;
        細(xì)胞特性
        1)來(lái)源:人正常肝組織
        2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
        3)含量:>1x10^6細(xì)胞數(shù)
        4)規(guī)格:t25瓶或者1ml凍存管包裝
        5)用途:僅供科研使用。
        運(yùn)輸和保存
        干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
        (1)1ml凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
        (2)t25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
        細(xì)胞接收后的處理
        1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將t25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
        2)請(qǐng)?jiān)?或5x顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
        3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8ml,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
        4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議t25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
        一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
        1)準(zhǔn)備1640(推薦yj-0002)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,20%;雙抗,1%。
        2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
        3)凍存液:90%血清,10%dmso,現(xiàn)用現(xiàn)配。
        二.細(xì)胞處理:
        1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
        將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6ml完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000rpm條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
        2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
        對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
        1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的pbs潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
        2.加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mm edta于培養(yǎng)瓶中(t25瓶1-2ml,t75瓶2-3ml),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%fbs的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
        3.輕輕打勻后吸出,在1000rpm條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新t25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
        3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
        下面t25瓶為例;
        1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
        2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
        3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
        注意事項(xiàng)
        1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
        2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
        3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
        4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
        5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有技術(shù)問題可以聯(lián)系咨詢技術(shù)售后,我們隨時(shí)給予解答。
        從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!
        如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。
        實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):
        免疫組化ihc染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
        細(xì)胞、組織tunel凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
        試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)
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        蛋白雙向(2-d)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
        蛋白相互作用分析
        堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
        pkc活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)
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