細胞株保存方法
1、需要*保存的細胞株必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將細胞株在 37℃放置太久,否則細胞株會變得渾濁,同時細胞株中的有效成分會被破壞，而影響細胞株質量。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于細胞株結冰時體積會增加約10%,因此,細胞株在凍入低溫冰箱前，必須預留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的細胞株為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)細胞株有懸浮物,則可將細胞株加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾細胞株。
3、瓶裝細胞株解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的細胞株放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將細胞株從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而 出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的細胞株.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使細胞株中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成細胞株沉淀物顯著增多,而且還會影響細胞株的質量.補體 參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞 發(fā)生化學趨化和活化。
5、細胞株中的沉淀物 絮狀物:主要是細胞株中的脂蛋白變性及解凍后細胞株中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響細胞株本身 的質量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下小黑點:經(jīng)過熱處理過的細胞株,沉淀物 的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象小黑點,常誤認為細胞株受污染。一般情況下,此小黑 點不會影響細胞生長,但如果懷疑細胞株質量,則應立即停止使用,更換另一批號的細胞株。