實(shí)驗(yàn)室工作中，經(jīng)常會(huì)需要用到純化的dna，這時(shí)我們通常需要使用一個(gè)商業(yè)的dna提取試劑盒對(duì)目的dna進(jìn)行分離純化。那么我們?cè)撊绾芜x擇合適的dna提取試劑盒呢？讓我們一起來看看吧！
一、試劑盒組分
目前大多數(shù)dna提取試劑盒遵循相同的基本步驟: 裂解，柱純化，洗滌雜質(zhì)，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個(gè)步驟的方式上有很大的不同。
二、使用的樣本類型
不同的dna來源有不同的試劑盒，從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋，也有許多專門用于某些應(yīng)用的試劑盒。
例如，土壤中的腐殖酸或血液中的血紅蛋白會(huì)污染純化的dna，從而干擾下游的dna實(shí)驗(yàn)（如pcr）。當(dāng)然，也有一些試劑盒會(huì)在進(jìn)行純化步驟之前專門去除這些組分。
如果想從pcr或瓊脂糖凝膠中純化dna，有許多方法可以提高瓊脂糖凝膠純化的回收率。
三、基因組與質(zhì)粒dna提取
一般來說，質(zhì)粒dna分離要比基因組dna分離溫和。這是因?yàn)獒槍?duì)質(zhì)粒dna的裂解步驟需要染色體dna與細(xì)胞蛋白片段保持結(jié)合，以防止其污染最終的樣品。
兩種類型的dna回收都有試劑盒，甚至有可以同時(shí)純化基因組dna和總rna的試劑盒。
四、細(xì)胞系與生物體
在選擇dna提取試劑盒時(shí)，最重要的變量可能是你所使用的生物體。
1. 細(xì)菌：
許多試劑盒都有用于細(xì)菌dna分離的不同成分，這些試劑盒之間的主要區(qū)別在于細(xì)胞是如何被分解的，因?yàn)橛行┘?xì)菌比其他細(xì)菌更更有挑戰(zhàn)性。
例如，形成生物膜的細(xì)菌可能比傳統(tǒng)的基于去垢劑的方法需要更強(qiáng)的裂解技術(shù)。
2. 動(dòng)物組織：
用于動(dòng)物組織dna分離的試劑盒通常具有更溫和的裂解技術(shù)，因?yàn)榇蠖鄶?shù)動(dòng)物細(xì)胞不像細(xì)菌細(xì)胞那樣有細(xì)胞壁。
然而，動(dòng)物組織dna提取的挑戰(zhàn)往往在于選擇合適的組織勻漿方法。此外，許多動(dòng)物dna純化試劑盒不使用苯酚/氯仿萃取或乙醇作為沉淀步驟，以減少破壞dna的風(fēng)險(xiǎn)。
3. 植物：
當(dāng)涉及到植物dna分離時(shí)，必須考慮到其他一些因素，需要注意污染物的去除。
植物在純化過程中通常含有未分離的糖，因此，洗滌劑選擇性地與dna結(jié)合并從溶液中析出，通常是先將洗滌劑溶解在高濃度的鹽溶液中，然后提取dna。
4. 血液：
由于技術(shù)上的許多最新進(jìn)展，血液dna分離試劑盒中有多種裂解技術(shù)和提取方法可供選擇。從血液中分離出的dna將在很大程度上決定你使用的裂解和提取的類型。
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